生物技術中細胞培養(yǎng)是核心工藝,高水平的細胞培養(yǎng)依賴于高質量的培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基的主要成份中,動物血清對細胞的生長繁殖發(fā)揮著重要作用。血清不僅富含多種蛋白、生長因子等細胞生長必須的營養(yǎng)成分,同時可提供貼壁因子、蛋白酶抑制劑等保護細胞不受傷害。
在動物血清中牛血清的應用最為廣泛,所以保證牛血清的質量也是促進生物制品質量提高的重要環(huán)節(jié)。一般體外細胞培養(yǎng)的牛血清多采用胎牛血清、新生牛血清、小牛血清。
不同牛血清的來源:胎牛血清源自健康母牛體內(nèi)的胎牛,是通過胎牛心臟穿刺采血獲取的血清;新生牛血清從出生2周內(nèi)的新生牛靜脈取血獲取。小牛血清采自出生2周到1年內(nèi)的小牛靜脈取血;
牛血清成品的獲取
• 胎牛、新生牛、小牛的血液采集及儲存
• 原血全程冷鏈運輸
• 原血冷凍離心,收集血清、凍存
• 血清使用前解凍、過濾
• 成品質量檢測
血清使用前解凍
① 將血清從冷凍室移至2~8℃冰箱解凍,再放置室溫進行徹底解凍,這樣可以避免溫度變化太大,造成蛋白析出;
?、?解凍時需不斷均勻搖晃,這樣操作可以使血清的溫度和成分均一,以減少絮狀沉淀物的生成;
?、?嚴禁將血清在37℃長時間孵育解凍,否則血清可能會產(chǎn)生沉淀&許多較不穩(wěn)定的成分也會受到破壞而影響血清品質。
血清使用前過濾工藝
步驟1:粗血清大多數(shù)前處理會使用線繞濾芯或膜堆過濾去除粘性物質;根據(jù)客戶工藝的不同,也會使用到濾袋、玻纖進行過濾。
PP折疊濾芯
PES/PVDF膜濾芯
步驟2:一步0.45-1μm或2-3μm+0.45-1μm兩步預過濾,其作用是去除雜質的同時保護后端膜過濾,比較常用的膜材質是親水性PES或PVDF;
步驟3:0.22μm和0.1μm的除菌、除支原體過濾,確保成品無細菌、無支原體。
過濾工藝其他注意點有哪些?
1. 血清過濾開始時,濾速可以控制相對小一些,后逐步升至正常濾速,這樣可以延長濾芯的使用壽命;
2. 一般血清過濾前和過濾完成后,需對0.22μm/0.1μm過濾產(chǎn)品進行完整性檢測。